Titration enzymatique par conductivité des régions de DNA libres dans les complexes polylysine-DNA. Application à l'étude de la structure de la chromatine

Institut de Physique Biologique, Faculté de Médecine 4, rue Kirschleger, 67085 Strasbourg Cedex, France.

Résumé

Une méthode enzymatique a été utilisée pour titrer les régions de DNA libres dans des complexes polylysine-DNA. La dégradation des complexes par la DNAse I est accompagnée par une augmentation de conductivité dont l'amplitude est directement liée à la proportion de DNA dégradable dans ces complexes. Ainsi la mesure de la variation de conductivité fournit une connaissance du taux de DNA accessible à l'enzyme. L'augmentation de conductivité a été théoriquement interprétée par l'augmentation du coefficient osmotique φ qui résulte de la fragmentation du polyélectrolyte initial en oligonucléotides très courts.

La méthode a ensuite été appliquée à des complexes biologiques nucléoprotéiques en supposant a priori que les interactions polylysine-DNA peuvent valablement simuler les interactions électrostatiques histones-DNA.

Abstract

Titration of the free DNA regions in polylsyne-DNA complexes was carried out enzymatically. The nuclease digestion of the complexes produces an increase in the conductance which is directly dependent on the proportion of exposed DNA in these complexes. Thus, we can determine the amount of available DNA in a complex from conductimetric data. The increase in conductivity is related to the increase in the osmotic coefficient φ which accompanies the degradation of the initial polyelectrolyte into small oligonucleotidic fragments.

The method was then applied to biological nucleoprotein complexes assuming a priori that the interactions between polylsysine and DNA are a suitable model for histone-DNA interactions.