Excision of 7,8-dihydro-8-oxoguanine from DNA by the Fpg protein

¹ Laboratoire des lésions des acides nucléiques, département de recherche fondamentale sur la matière condensée, centre d'études nucléaires de Grenoble, 85X, 38041 Grenoble Cedex, France ;
² groupe réparation des lésions radio- et chimio-induites, UA147, Centre national de la recherche scientifique and U140 Institut national de la santé et de la recherche médicale, Institut Gustave-Roussy, 94800 Villejuif Cedex France.

Abstract

A sensitive method involving the combined use of reversed-phase high- performance liquid chromatography and electrochemical detection was used in order to monitor the formation of 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG) within double stranded DNA photooxidized by methylene blue. The assay requires acidic hydrolysis of the macromolecule. Excision of 7,8-dihydro-8- oxoguanine was found to occur almost quantitatively when photooxidized DNA was incubated with the Fpg protein, a DNA repair enzyme.

Résumé

La chromatographie liquide haute performance couplée avec une détection ampérométrique a été utilisée afin de mettre en évidence la formation de la 7,8-dihydro-8-oxoguanine dans l’ADN photosensibilisé par le bleu de méthylène. La mesure de la base oxydée à été effectuée après hydrolyse acide de la macromolécule d’ADN. L’utilisation de cette méthode nous a permis de montrer que l’incubation de l’ADN irradié en présence de la protéine Fpg conduit à l’excision quasi-quantitative de la 7,8-dihydro-8- oxoguanine.