Fragmentation radioinduite de l'ADN et réparation étudiée par immunomarquage anti poly(ADP-ribose)polymérase (PARP) dans les cellules de hamster chinois (CHO)

Gamma-ray induced DNA breaks and repair studied by immunolabelling of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) in chinese hamster ovary cells (CHO)

¹ Institut Curie, UMR 218 du CNRS, LCR 1 du CEA, 75005 Paris, France
² Hôpital Sainte Anne, 75674 Paris, France
³ École Supérieure de Biotechnologie, URP 9003, 67000 Strasbourg, France
⁴ Institut Curie, UMR 144 du CNRS, 75005 Paris, France

Résumé

Le poly(ADP-ribose)polymérase est une enzyme nucléaire ubiquitaire capable de se fixer sur les cassures de l'ADN. Sur une lignée sauvage de cellules d'ovaire de hamster chinois (CHO-K1) cultivée sur lame et irradiée aux rayons γ à haut débit de dose (HD) 12,8 Gy/min ou à moyen débit de dose (MD) 5 Gy/min, nous avons réalisé un immunomarquage anti-polymères d'ADP-ribose immédiatement après l'irradiation γ ou après trois heures d'incubation à 37 °C. La quantification et la localisation des lésions radioinduites ont été réalisées par microscopie confocale. Les résultats montrent une relation dose-effet et un effet de débit de dose, ainsi qu'une disparition du signal après 3 heures à 37 °C. La présence de la PARP semble donc bien refléter la fragmentation radioinduite de l'ADN.

Abstract

The poly(ADP-ribose)polymerase is a nuclear ubiquitous enzyme capable of binding to DNA breaks. Chinese hamster ovary cells were (CHO-K1) cultured on slides and γ-irradiated (¹³⁷Cs) at a high (12.8 Gy/min) or medium dose rate (5 Gy/min), and immunolabelling against (ADP-ribose) polymers immediatly or three hours after irradiation. Quantification and localisation of γ-ray induced breaks was performed by confocal microscopy. The results show a dose effect relationship, a dose-rate effect and the signal disappearence after 3 hours at 37 °C. The presence of PARP activity appears to reflect γ-rays induced DNA fragmentation.