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J. Chim. Phys.
Volume 94, 1997
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Page(s) | 1 - 17 | |
DOI | https://doi.org/10.1051/jcp/1997940001 | |
Published online | 29 May 2017 |
Mesure de la diffusivité de l’oxygène par inhibition de fluorescence de sondes pyréniques dans la membrane d’érythrocyte enrichie en cholestérol
1 Laboratoire d'hématologie, EA 1728, faculté de médecine, 54505 Vandœuvre-tès-Nancy, France.
2 INSERM U 272, 24, rue Lionnois, 54000 Nancy, France.
3 DCPR (GRAPP), URA 328 CNRS, ENSIC-INPL, 1, rue Grandville, 54000 Nancy, France.
4 Laboratoires Negma, av de l’Europe,
78117 Toussus-le-Noble, France.
L’influence du cholestérol sur la diffusibilité de l’oxygène dans les membranes biologiques a été étudiée par inhibition de la fluorescence des acides pyrènebutyrique (PBA) et dodécanoïque (PDA). La « fluidité membranaire », mesurée par polarisation de fluorescence avec des sondes spécifiques de différentes régions membranaires (6, 12-AS, DPH, TMA- DPH), évolue inversement au rapport cholestérol/protéine (C/Pt) et varie en fonction de la région étudiée. La durée de vie du monomère du PDA, mesurée par fluorescence résolue dans le temps, croît avec le rapport C/Pt en absence d’O2. En présence d’O2, les valeurs des constantes d’inhibition dynamique du PDA augmentent avec le rapport C/Pt (diffusivité apparente d’02 accrue). La diffusion d’O, augmenterait uniquement dans la région centrale de la membrane, caractérisée par le PDA. La variation de la solubilité d’O2 dans des domaines restreints de polarité différente pourrait expliquer l’inhibition de fluorescence du PDA.
Abstract
The effect of membrane cholesterol incorporation on the process of oxygen diffusion was studied by fluorescence quenching of pyrenebutyric (PBA) or pyrenedodecanoic (PDA) acid. The « membrane fluidity », studied by fluorescence polarization method with 4 probes with known specificity for membrane areas (6, 12-AS, DPH, TMA-DPH), decreased under increasing cholesterol/protein (C/Pt) ratio. Cholesterol induces a membrane rigidification at different depths in the membrane bilayer. In the absence of O2, the natural lifetime of PDA, measured by time-resolved fluorescence, increased under increasing C/Pt ratio. In the presence of O2, the dynamic constants quenching of PDA increased with C/Pt ratio. Oxygen diffusion would increase only in the middle of the bilayer in which PDA is embedded. Variations in oxygen solubility in different polarity micro-domains could explain PDA fluorescence inhibition.
Mots clés : membrane / oxygène / diffusion / cholestérol / fluorescence
Key words: membrane / oxygen / diffusion / cholesterol / fluorescence
© Elsevier, Paris, 1997